Лабораторн – 11
Визначення інгібуючих речовин в молоці
Мета заняття. Вивчити методику (мікробіологічну) визначення інгібіторів у молоці.
Завдання: 1.Встановити як антибіотики, дезінфікуючі речовини та інші фактори, що є в молоці впливають на хід реакції на інгібітори.
Обладнання та матеріали. Проби сирого молока, пробірки скляні (висота 150 і діаметр 16мм), штатив для пробірок, колби мірні на 200см3; піпетки, редуктазник або водяна баня, що забезпечують регулювання
Для визначення інгібуючих речовин в сирому молоці з резазурином: основний розчин резазурину, препарат сухий для контролю визначення інгібуючих речовин у молоці (СКІР).
Для визначення інгібуючих речовин в сирому молоці з метиленовим блакитним: пептон сухий ферментативний для бактеріологічних цілей та приготовлену з нього суміші для визначення інгібуючих речовин в молоці з метиленовим блакитним.
Приготування всіх необхідних робочих розчнів та тест-культур наведено в додатку Г.
Довідковий матеріал. Антибіотики потрапляють у молоко, в основному при лікуванні маститу (запалення молочної залози) у корів. Перш за все це є небезпечним для здоров’я людей, і в першу чергу для дітей. Так постійне вживання молока, що містить антибіотики, може викликати нечутливість до них людського організму, до лікувального препарату та призвести до утворення в організмі людини стійких до антибіотиків патогенних бактерій та викликати зміни в складі кишкової мікрофлори.
Дезінфікуючі речовини в молоко потрапляють у молоко із продезінфікованого та погано ополіснутого після дезінфекції молочного обладнання.
В технологічному плані антибіотики та дезінфікуючі речовини в молоці є небажаними, і тому що вони впливають на молочне бродіння, і тим самим погіршують якість молока, як сировини для виробництва молочних та кисломолочних продуктів.
Визначення інгібуючих речовин в сирому молоці проводять двома методами: з індикаторами резазурином і метиленовим блакитним ( згідно ГОСТ 23454-79).
Стандарт поширюється на молоко і включає методи визначення інгібуючих речовин, до яких відносять антибіотики, формалін, пероксид водню та інші мийні, дезінфікуючі та консервуючі речовини.
Для проведення аналізу відбирають 50см3 молока середньої проби, яку можна зберігати у холодильнику за температури 6–8°С не більше доби.
Метод визначення інгібуючих речовин з індикатором резазурином.
Сутність методу. Метод базується на відновленні резазурину при розвитку в молоці чутливих до інгібуючих речовин мікроорганізмів роду St. thermophilus (термофільний стрептокок). Чутливість методу дозволяє визначити в молоці наявність антибіотиків та залишків дезінфікуючих речовин.
Рис. St. Thermophilus (термофільний стрептокок)
Проведення аналізу. У чисті пробірки наливають по 10см3 молока і закривають стерильними гумовими пробками. Решту проби зберігають до кінця аналізу у холодильнику за температури 6–8ºС. Одночасно проводять контрольний аналіз. Для цього у пробірку наливають 10см3 відновленого препарату (СКІР), одержаного розчиненням сухого препарату у флаконі з 10см3 дистильованої води за температури 50ºС.
Пробірки з дослідним молоком і контрольною пробою нагрівають на водяній бані до 85–90ºС. Потім охолоджують до
43–45ºС і стерильною піпеткою у пробірки вносять 0,3см3 робочої тест-культури. Вміст пробірки перемішують триразовим перевертанням і витримують протягом 2 год у редуктазнику або на водяній бані за температури 42–43ºС.
У пробірки з молоком і контрольною пробою вносять по 1см3 0,05%-ного розчину резазурину за температури 18–20ºС. Вміст пробірок перемішують дворазовим перевертанням. Пробірки витримують у редуктазнику або на водяній бані протягом 15хв за температури 42–43ºС.
Обробка результатів. За відсутності інгібуючих речовин досліджуване молоко буде рожевим або білим. За наявності інгібуючих речовин молоко буде мати синьо-стальне, синьо-фіолетове або фіолетове забарвлення.
Метод дає змогу виявити в молоці вміст пеніциліну більше 0,01МО/см3; стрептоміцину від 30 до 50мкг/см3; тетрацикліну, окситетрацикліну – 1МЕ/см3; олеандоміцину – 10МЕ/см3; масову частку пероксиду водню – 0,01%; масову частку формаліну – 0,003%..
Метод визначення інгібуючих речовин з метиленовим блакитним
Сутність методу.
Проведення аналізу. У чисті пробірки наливають 10 см3 досліджуваного молока і закривають (нещільно) гумовими пробками. Пробірки з досліджуваним молоком нагрівають на водяній бані до 87±2ºС з витримуванням до 10 хв і охолоджують до 43±2ºС. Після цього у пробірки стерильною піпеткою вносять по 2 см3 приготовленої суміші для визначення інгібуючих речовин в молоці з метиленовим блакитним, перемішують триразовим перевертанням і витримують на водяній бані від 1год 40 хв до 2 год 20 хв за температури 41–42ºС.
Обробка результатів. За відсутності у молоці інгібуючих речовин вміст пробірок буде мати білий колір. Синє кільце, що утворюється в пробірці на поверхні молока висотою 1 см, до уваги не беруть.
Послідовність виконання роботи
Завдання 1. Дослідити проби сирого молока на наявність чи відсутність інгібуючих речовин в них.
Після проведення аналізу результати занести в таблицю.
Таблиця 14
Результати виявлення інгібуючих речовин в пробах сирого молока
|
№ проби |
Колір вмісту пробірок на початку реакції |
Колір вмісту пробірок на кінець реакції |
Інгібуючі речовини |
|
|
Відсутні |
Наявні |
|||
Висновок.
Питання для самоконтролю.
1.Що відносять до інгібуючих факторів у молоці?
2.Як вони впливають на якість молока?
3.В чому сутність методу визначення інгібуючих речовин з індикатором резазурином?
4.Чому антибіотики та інші невластиві для молока хімічні сполуки в молоці називають інгібіторами?
Нормативні посилання.
ДСТУ 3662 – 97 МОЛОКО КОРОВ’ЯЧЕ НЕЗБИРАНЕ. Вимоги при закупівлі.
ДСТУ ISO 707 – 2002 МОЛОКО І МОЛОЧНІ ПРОДУКТИ. Настанови з відбирання проб.
ДСТУ ISO 5538:2004 МОЛОКО І МОЛОЧНІ ПРОДУКТИ. Відбирання проб. Контроль за якісними ознаками.
ДСТУ ISO 13969:2005 (IDF 183:2003) МОЛОКО ТА МОЛОЧНІ ПРОДУКТИ. Настанови щодо стандартизованого описування випробування інгібіторів мікроорганізмів.
ГОСТ 13928 – 84 Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора проб и подготовка их к анализу. (Молоко та вершки, що заготовляють. Правила приймання, методи відбору проб та підготовка їх до контролювання).
ГОСТ 23454 – 79 Молоко. Методы определения ингибирующих веществ.
ГОСТ 26809 – 86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу.
Реферати
Читати далі